焦深

    焦深也稱(chēng)為焦點(diǎn)的深度，當(dāng)焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)樣本的某一點(diǎn)時(shí)，不僅看清楚的是這一點(diǎn)，而且它的上下兩側(cè)也能同時(shí)看清楚，看到的物體不僅僅是一個(gè)平面，而且還看到有一定的厚度，這個(gè)清晰的厚度部分即是焦深。焦深的計(jì)算公式為：

D=k*η/(M*NA)  ①

式中:k為常數(shù),約為240um;η為被檢物體與物鏡間介質(zhì)的折射率;M為總放大率;NA為物鏡的數(shù)值孔徑,

由式①可知,總放大率愈高,數(shù)值孔徑值愈大,焦深愈淺。焦深與顯微照相關(guān)系密切,例如,一個(gè)用加拿大樹(shù)膠(折射率1.5)封埋的6um厚的標(biāo)本,當(dāng)用40×,NA為0.65物鏡和16×目鏡觀察時(shí),按式①計(jì)算,其焦深為2.8 um,要看清這個(gè)標(biāo)本的全厚度景像需要進(jìn)行兩次調(diào)焦;而當(dāng)用100×,NA為1.25物鏡和10×目鏡觀察時(shí),其焦深為0.29 um,要看清這個(gè)標(biāo)本的全厚度需要進(jìn)行20次調(diào)焦。因此在顯微攝影中,為了加大景深,照顧到多一點(diǎn)的內(nèi)容,有時(shí)就用NA值低、放大率小的物鏡和采用折射率較高的封藏劑。