應(yīng)用透射熒光顯微鏡時, 根據(jù)不同研究目的,不同熒光素需要選用不同激發(fā)濾光片和與之相匹配的阻擋濾光片,而在落射熒光顯微技術(shù)中需要選用激發(fā)濾光片、色光分離反射濾光片和阻擋濾光片,選擇和搭配時必須遵守下述原則。
(1)濾光片的順序不能顛倒,最靠近光源處為吸熱濾光片,次之應(yīng)放置激發(fā)濾光片組合，而后為被檢標本.最后安放阻擋濾光片,這是透射熒光顯微鏡的濾光片使用順序。在落射熒光顯微鏡應(yīng)用中在激發(fā)濾光片和被檢標本之間必須加進色光分離反射濾光片(FT或RKP)。
(2)使用濾光片時必須遵守斯托克斯定律:吸熱濾光片的透射波長<激發(fā)濾光片的透射波長<色光分離反射濾光片的透射波長<阻擋濾光片的透射波長。
(3)使用濾光片時必須注意配用濾光片的透射譜線之間愈是相互靠近愈好。