將顯微鏡的明場照明聚光鏡的中心遮攔，并令照明光束的最小孔徑大于物鏡孔 徑，則光源經(jīng)聚光鏡發(fā)出的光線無法進(jìn)入物鏡，視野將一片黑暗。但是，如果標(biāo)本面 上存在物體，那么，物體的衍射光在黑暗的背景上形成一個(gè)明亮的像，這就是暗場照 明的原理。 利用暗場照明技術(shù)可以觀察到明場照明看不到的物體，也可以觀察到細(xì)菌、細(xì)胞 等活體標(biāo)本，由于成像對比度好，即使小于物鏡分辨率的微粒，每個(gè)微粒的衍射光在 暗場中形成各自的彩色衍射光環(huán)。因此觀察者仍能覺察到微粒的存在，這也是超顯微 術(shù)的一種方式。 透射式暗場照明聚光鏡具有超大的數(shù)值孔徑，光學(xué)系統(tǒng)如下圖 所示。它適用于 生物顯微鏡，用來觀察有規(guī)則的物體、具有線性結(jié)構(gòu)的物體、以及各種活體細(xì)胞。 當(dāng)物鏡數(shù)值孔徑很大時(shí)，照明的直射光易于直接射入視場，因此聚光鏡中必須帶 有可變孔徑光闌，縮小光闌可以阻止直射光射入視場。